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人白細(xì)胞介素35elisa試劑盒檢測(cè)中的技術(shù)支持

發(fā)布時(shí)間: 2017-05-23  點(diǎn)擊次數(shù): 1171次

人白細(xì)胞介素35(IL-35)elisa試劑盒簡(jiǎn)介

白細(xì)胞介素即是由多種細(xì)胞產(chǎn)生并作用于多種細(xì)胞的一類細(xì)胞因子。[1]

目前至少發(fā)現(xiàn)了38個(gè)白細(xì)胞介素[2]  ,分別命名為IL-1~IL38,功能復(fù)雜,成網(wǎng)絡(luò),復(fù)雜重疊[3]  ;在免疫細(xì)胞的成熟、活化、增殖和免疫調(diào)節(jié)等一系列過程中均發(fā)揮重要作用,此外它們還參與機(jī)體的多種生理及病理反應(yīng)。[1]

免疫系統(tǒng)細(xì)胞的增殖、分化和功能受到一系列細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)。根據(jù)細(xì)胞因子的結(jié)構(gòu)同源性可將其分為幾個(gè)蛋白質(zhì)家族,如IL-1家族、IL-6家族、IL-10家族、腫瘤壞死因子家族和造血因子家族等。白細(xì)胞介素穿插歸類為其中。

IL-38

結(jié)構(gòu):白細(xì)胞介素(interleukin, IL)-38是zui近發(fā)現(xiàn)的IL-1家族細(xì)胞因子的第10個(gè)成員。IL-38的特異性受體為IL-36R,它是IL-36的部分受體拮抗劑。

功能:IL-38可抑制Th17細(xì)胞產(chǎn)生IL-17和IL-22等炎癥介質(zhì),也可抑制IL-36γ誘導(dǎo)產(chǎn)生IL-8,從而抑制炎癥反應(yīng)。

人白細(xì)胞介素35(IL-35)elisa試劑盒檢測(cè)中的

間接法

  1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;

  2.次日洗滌3次;

  3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌;

  4.(同時(shí)做空白、陰性及陽性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml;

  5.37℃孵育30-60分鐘,洗滌;

  6.zui后一遍用DDW洗滌。

    7.加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

  8. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

  9. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽性。

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