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CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑盒為您的實驗錦上添花

發(fā)布時間: 2017-09-06  點擊次數: 1333次

CCK-8細胞增殖及毒性檢測試劑盒為您的實驗錦上添花!

 

注意事項:

①建議先做幾個孔摸索接種細胞的數量和加入 CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時間。

②白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。

③當使用標準 96 孔板時,貼壁細胞的zui小接種量至少為 1 ,000 個/孔 (100 µL 培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低,因此接種量不低于 2,500 個/孔 ( 100 µL 培養(yǎng)基)。如果要使用 24 孔板或 6 孔板實驗,請先計算每孔相應的接種量,并按照每孔培養(yǎng)基總體積的 10% 加入 CCK-8 溶液。

 

④如果沒有 450nm 的濾光片,可以使用吸光度在 430-490 nm 之間的濾光片,但是 450nm 檢測靈敏度zui高。

⑤培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計算時,通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會對檢測造成影響。

Cell Counting Kit-8 簡稱CCK-8 試劑盒,為MTT 法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒??捎糜谒幬锖Y選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗。

使用說明: 
一、制作標準曲線(測定細胞具體數量時 (測定細胞具體數量時) 
1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量,然后接種細胞。 
2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細胞濃度梯度,一般要做 3-5 個細胞濃度梯度,每組 3-6 個復孔。 
3、接種后培養(yǎng)至細胞貼壁,然后加 CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時間后測定 OD 值,制作出一條以細胞數量為橫坐標(X 軸),OD 值為縱坐標(Y 軸)的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量(試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致,便于確定細胞的接種數量以及加入 CCK-8 后的培養(yǎng)時間。)

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二、細胞活性檢測

1、在 96 孔板中接種細胞懸液(100µL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預培養(yǎng)(在 37℃,5% CO2 的條件下)。

2、向每孔加入 10µL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 OD 值的讀數)。

3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育 1-4 小時。

4、用酶標儀測定在 450nm 處的吸光度。

5、如果暫時不測定 OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入 10µL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內吸光度不會發(fā)生變化。

三、細胞增值-毒性檢測

1、在 96 孔板中配置 100 µL 的細胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預培養(yǎng) 24 小時(在 37 ℃,5% CO2 的條件下)。

2、向培養(yǎng)板加入 10µL 不同濃度的待測物質。在培養(yǎng)箱孵育一段適當的時間(例如:6、12、24 或 48 小時)。

3、向每孔加入 10 µL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會影響 OD 值的讀數)。如果待測物質有氧化性或還原性的話,可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基),去掉藥物影響。

4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內孵育 1-4 小時。

5、用酶標儀測定在 450 nm 處的吸光度。

6、如果暫時不測定 OD 值,打算以后測定的話,可以向每孔中加入 10µL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時內吸光度不會發(fā)生變化。

活力計算:.

細胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[ A(0 加藥)-A(空白)]×100

A(加藥):具有細胞、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A(空白):具有培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液而沒有細胞的孔的吸光度

A(0 加藥):具有細胞、CCK-8 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

細胞活力:細胞增殖活力或細胞毒性活力

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