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可溶性CD14(sCD14)ELISA試劑盒太了

發(fā)布時(shí)間: 2017-09-19  點(diǎn)擊次數(shù): 1098次

可溶性CD14(sCD14)ELISA試劑盒基本信息

MALISZEWSKI等于1985年又從人血漿中發(fā)現(xiàn)了與單核細(xì)胞表面的CD14(membrane CD14,mCD14)結(jié)構(gòu)相似的可溶性CD14(soluble CD14,sCD14)[2]。但是當(dāng)時(shí)人們并不知道CD14的具體功能。直到1990年,WRIGHT等人才次發(fā)現(xiàn)CD14可作為L(zhǎng)PS/LPS結(jié)合蛋白(LPS-binding protein,LBP)復(fù)合物受體,介導(dǎo)LPS性細(xì)胞反應(yīng)。

可溶性CD14(sCD14)ELISA試劑盒檢測(cè)技術(shù)簡(jiǎn)介

雙抗體夾心法

  1. 包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃ 過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗滌,下同)。

  2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。

  3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時(shí),洗滌。

  4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。

  5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。

  6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。

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