大鼠芳香酶（ARO）ELISA試劑盒大促！

產(chǎn)品簡介：

芳香化酶(aromatase, CYP19)是細(xì)胞色素P450酶系中的一種, 可以催化雄烯二酮、睪酮脫去19位碳并使A環(huán)芳構(gòu)化, 分別形成雌二醇和雌酮, 它是雌激素生物合成的限速酶。芳香化酶是屬于細(xì)胞色素P450的一種復(fù)合酶，可氧化脫去C19類固醇(雄烯二酮和睪酮)的19-甲基，使A環(huán)芳構(gòu)化，從而轉(zhuǎn)變成C18雌激素(雌酮和雌二醇)。因此，芳香化酶是體內(nèi)合成雌激素的重要酶。

實(shí)驗(yàn)原理：

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠芳香酶（ARO）水平。用純化的大鼠芳香酶（ARO）捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入大鼠芳香酶（ARO），再與HRP標(biāo)記的檢測抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠芳香酶（ARO）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠芳香酶（ARO）含量。

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操作步驟：

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外。
4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
9. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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