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明膠酶譜法分析試劑盒染色很關(guān)鍵!

發(fā)布時(shí)間: 2019-01-07  點(diǎn)擊次數(shù): 1231次

明膠酶譜法分析試劑盒染色很關(guān)鍵!



產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)明膠酶譜法試劑盒操作簡(jiǎn)單,靈敏度高。上海信帆生物供應(yīng)的MMP試劑盒采用酶譜法(zymography)檢測(cè) MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測(cè)方法,其靈敏度可達(dá) 1 nM,高于 ELISA 方法,而且可檢測(cè)幾百個(gè)樣本。

 

基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無活性的酶原形式分泌,活化后能夠降解 細(xì)胞外基質(zhì)的膠原蛋白,又稱膠原酶。通過影響細(xì)胞外基質(zhì),膠原酶參與胚胎發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組 織重塑等過程,并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經(jīng)等許多疾病過程。血漿與組織中的 MMP-2、MMP-9 參與各種生理與病理過程,其在診斷和治療中的意義日益受到重視  。


本試劑盒采用酶譜法(zymography)檢測(cè) MMP-2、MMP-9  活性。Zymography  是一種廣為使用的、基 于 SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測(cè)方法,其靈敏度可達(dá) 1 nM,高于 ELISA 方法 2,其 基 本原理和程序是:制備加有膠原酶底物的 SDS-PAGE 凝膠,含蛋白酶的樣品在此凝膠中進(jìn)行電 泳, 電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng) Buffer 孵育,凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深 染,形 成深色背景,但在有蛋白酶條帶的位置,蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白,因而不被染色 而形成透 亮區(qū)域,從而能同時(shí)指示 MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。

本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液,可檢測(cè)少至 0.1~0.5 µl 血液中的 MMP-2、MMP- 9 酶譜及活性,檢 測(cè)靈敏度~1 nM。試劑盒可進(jìn)行 50 次標(biāo)準(zhǔn)小膠檢測(cè),如果小膠加樣孔為 10~15個(gè),則總計(jì)可檢測(cè) 500~750 個(gè)樣品。

 

明膠酶譜法分析試劑盒染色很關(guān)鍵!


染色步驟:

1. 此染色液即為工作液,使用時(shí)直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養(yǎng)皿中以考馬斯亮藍(lán)染色液覆蓋凝 膠,并緩慢搖動(dòng) 2h;

2. 傾去染色液,用脫色液沖洗凝膠;

3. 以脫色液覆蓋凝膠,緩慢搖動(dòng) 2h,傾去脫色液,再加入新脫色液進(jìn)行脫色,直至獲得清晰的 藍(lán)色的條帶和干凈的背景(通常此過程需要 2~4h,也可脫色過一夜至清晰的藍(lán)色的條帶和干凈 的背景);

4. 對(duì)凝膠進(jìn)行分析和照相,凝膠可放置在    7%的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置(P2000)對(duì) 凝膠進(jìn)行處理后保存。


安全性:含有甲醇,無特殊毒性,按一般化學(xué)品操作規(guī)程處理。



說明:

1. 染色液配方:0.25g 考馬斯亮藍(lán) R250 420ml 甲醇 100ml 冰乙酸,定容至 1000ml,混合 1h 后用 Whatman 1 號(hào)濾紙過濾,于室溫可無限期保存;

2. 脫色液配方:冰醋酸:甲醇:水=7:5:88(V:V:V);

3. 保存液:7%冰醋酸;

4. 凝膠染色之后,染色液可以回收利用,裝入新容器內(nèi),室溫或 4 ºC 保存,可反復(fù)使用 2-4 次。

 

明膠酶譜法分析試劑盒染色很關(guān)鍵!

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