信帆生物明膠酶譜法分析試劑盒發(fā)表的文獻(xiàn)！


描述：基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無(wú)活性的酶原形式分泌，活化后能夠降解 細(xì)胞外基質(zhì)的膠原蛋白，又稱(chēng)膠原酶。通過(guò)影響細(xì)胞外基質(zhì)，膠原酶參與胚胎發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組 織重塑等過(guò)程，并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經(jīng)等許多疾病過(guò)程。血漿與組織中的 MMP-2、MMP-9 參與各種生理與病理過(guò)程，其在診斷和治療中的意義日益受到重視  。

 

本試劑盒采用酶譜法(zymography)檢測(cè) MMP-2、MMP-9  活性。Zymography  是一種廣為使用的、基 于 SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測(cè)方法，其靈敏度可達(dá) 1 nM，高于 ELISA 方法 2，其 基 本原理和程序是：制備加有膠原酶底物的 SDS-PAGE 凝膠，含蛋白酶的樣品在此凝膠中進(jìn)行電 泳， 電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng) Buffer 孵育，凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深 染，形 成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色 而形成透 亮區(qū)域，從而能同時(shí)指示 MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液，可檢測(cè)少至 0.1~0.5 µl 血液中的 MMP-2、MMP- 9 酶譜及活性，檢 測(cè)靈敏度~1 nM。試劑盒可進(jìn)行 50 次標(biāo)準(zhǔn)小膠檢測(cè)，如果小膠加樣孔為 10~15個(gè)，則總計(jì)可檢測(cè) 500~750 個(gè)樣品。


明膠酶譜分析試劑盒發(fā)表的文獻(xiàn)：

《綠茶多酚EGCG增強(qiáng)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性及其相關(guān)機(jī)制研究》

 部分綠茶多酚EGCG增強(qiáng)高脂飲食喂養(yǎng)ApoE缺陷小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性目的:急性冠脈綜合征(Acute coronary syndrome,ACS)是指一系列嚴(yán)重的急性心肌缺血性疾病,主要包括不穩(wěn)定型心絞痛以及急性ST段抬高或非ST段抬高型心肌梗死。目前大量研究資料已證實(shí),急性冠脈綜合征發(fā)病的主要病理生理基礎(chǔ)是冠狀動(dòng)脈中不穩(wěn)定型動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的破裂,引起冠狀動(dòng)脈內(nèi)急性血栓形成,繼而引起心肌嚴(yán)重的缺血、缺氧。近年來(lái),多項(xiàng)流行病學(xué)研究報(bào)道稱(chēng),飲用綠茶可以明顯降低冠心病的發(fā)病率。綠茶的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用主要原因是綠茶中含有大量的多酚類(lèi)化合物,其中含量多的為兒茶素。

綠茶中兒茶素主要成分包括表兒茶素(EC),表兒茶素沒(méi)食子酸酯(ECG),表沒(méi)食子兒茶素(EGC)和表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)。在這些成分中,以EGCG含量豐富,活性zui強(qiáng),已被證明具有多種藥理學(xué)作用和生物學(xué)特性。我們進(jìn)行本研究主要目的就是為了證實(shí)綠茶多酚EGCG是否能夠增強(qiáng)高脂飲食喂養(yǎng)ApoE缺陷小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性并探討其可能的相關(guān)機(jī)制。方法:30只雄性ApoE缺陷小鼠(6周齡,體重18-20g)被隨機(jī)分為對(duì)照組(n=15)以及EGCG組(n=15)這些小鼠均使用含有21%脂肪以及0.15%膽固醇的高脂飲食喂養(yǎng)。

EGCG組以及對(duì)照組分別給予EGCG(10mg)或者同等劑量的0.9%生理鹽水進(jìn)行腹腔注射共16周。隨后麻醉處死小鼠,取小鼠頭臂干動(dòng)脈并予固定石蠟包埋。小鼠頭臂干橫切面進(jìn)行HE染色以及Masson染色分別評(píng)估動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形態(tài)以及膠原含量。此外,使用免疫組織化學(xué)染色的方法分析小鼠斑塊中巨噬細(xì)胞以及平滑肌細(xì)胞成分的比例。蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)用來(lái)檢測(cè)斑塊中蛋白表達(dá)水平,明膠酶譜法用來(lái)檢測(cè)斑塊中基質(zhì)金屬蛋白酶的活性。

后,我們用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)小鼠血清炎癥因子單核細(xì)胞趨化因子-1(MCP-1)、白介素-6(IL-6)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)以及干擾素-γ(IFN-γ)水平。

結(jié)果:高脂飲食喂養(yǎng)16周后,ApoE缺陷小鼠頭臂干動(dòng)脈近端橫切面HE染色可見(jiàn)明顯的動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成,提示造模成功。另外,與對(duì)照組相比,EGCG組ApoE缺陷頭臂干動(dòng)脈近端粥樣硬化病變程度明顯減輕。Masson染色結(jié)果提示,EGCG干預(yù)后動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中膠原成分明顯增加。免疫組織化學(xué)染色發(fā)現(xiàn)EGCG組斑塊中巨噬細(xì)胞比例明顯降低,而斑塊中平滑肌成分顯著增高。

此外,Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)EGCG可以顯著降低ApoE缺陷小鼠斑塊中基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子(EMMPRIN)的表達(dá)。同樣,明膠酶譜法結(jié)果提示EGCG組斑塊中MMP-2和-9活性較對(duì)照組明顯減低。后,與對(duì)照組相比,EGCG腹腔注射后,ApoE缺陷小鼠血清炎癥因子MCP-1、IL-6、TNF-α以及IFN-γ水平顯著降低。

結(jié)論:本研究結(jié)果提示,綠茶多酚EGCG能夠增強(qiáng)高脂飲食喂養(yǎng)ApoE缺陷小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性。此外,EGCG增強(qiáng)斑塊穩(wěn)定性的內(nèi)在機(jī)制可能與其抑制多種炎癥因子、基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子以及機(jī)制金屬蛋白酶表達(dá)有關(guān)。 

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