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去內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒使用方法!

發(fā)布時(shí)間: 2019-05-05  點(diǎn)擊次數(shù): 1477次

去內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒使用方法!

 

本試劑盒采用堿裂解法裂解細(xì)胞,根據(jù)離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下特異性地結(jié)合溶液中的 DNA 的原理特異性提取質(zhì)粒 DNA。 離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料能、專(zhuān)一地吸附 DNA,可大限度去除雜質(zhì)蛋白及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。

本公司研制的內(nèi)毒素清除劑,可大限度地除去內(nèi)毒素。從 1-5ml 大腸桿菌 LB培養(yǎng)液中,可快速提取 5-15μg 高純度質(zhì)粒 DNA,提取率達(dá) 85-90%。使用本試劑盒提取的質(zhì)粒 DNA 純度高,可直接用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染等要求較高的實(shí)驗(yàn),以及其他各種常規(guī)操作,包括酶切、PCR、測(cè)序、連接和轉(zhuǎn)化等試驗(yàn)。

操作方法:

1、取 1-5ml 細(xì)菌培養(yǎng)物,12000rpm 離心 1min,吸除上清(菌液濃度較低時(shí)可多次離心收集到一個(gè)離心管中)。
2、向留有菌體沉淀的離心管中加入 200μl 溶液 P1(請(qǐng)先檢查是否已加入 RNaseA),使用移液器或旋渦振蕩器*懸浮細(xì)菌細(xì)胞沉淀。注意:如果菌塊未*混勻,會(huì)影響裂解導(dǎo)致質(zhì)粒提取量和純度偏低。
3、向離心管中加入 200ul 溶液 P2,溫和地上下翻轉(zhuǎn) 6-8 次使菌體充分裂解。注意:混勻一定要溫和,以免污染細(xì)菌基因組 DNA,此時(shí)菌液應(yīng)變得清亮粘稠,作用時(shí)間不要超過(guò) 5 min,以免質(zhì)粒受到破壞。

 

去內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒使用方法!

 

使用注意:

1. 使用前請(qǐng)先檢查溶液 P2、P3 和 P4 是否出現(xiàn)混濁,如有混濁現(xiàn)象,可在 37℃水浴中加熱幾分鐘,待溶液恢復(fù)澄清后再使用。
2. 洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于 50ul,體積過(guò)小影響回收效率;洗脫液的 pH 值對(duì)洗脫效率也有影晌,若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其 pH 值在 8.0 左右(可用 NaOH 將水的 pH 值調(diào)至此范圍), pH 值低于 7. 0 會(huì)降低洗脫效率。DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防 DNA 降解。
3. 質(zhì)粒 DNA 濃度>1mg/ml 時(shí)清除內(nèi)毒素效率降低。由于質(zhì)粒 DNA 本身的性質(zhì),清除過(guò)程可導(dǎo)致部分質(zhì)粒 DNA丟失,但內(nèi)毒素卻能得到大限度清除。
4. 所有溶液應(yīng)用無(wú)內(nèi)毒素的高純水配制,所有器械材料均應(yīng)不含內(nèi)毒素,玻璃器皿可高溫烘烤,非揮發(fā)性水溶液可高壓處理。
5. DNA 濃度及純度檢測(cè):得到的質(zhì)粒 DNA 純度與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)。 得到的DNA 可用瓊脂糖疑膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。 DNA 應(yīng)在 OD260 處有顯著吸收峰,OD260 值為1 相當(dāng)于大約 50μg/ml 雙鏈 DNA、 40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/OD280 比值應(yīng)為 1.7-1.9,如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液,而使用去離子水,比值會(huì)偏低,因?yàn)?pH 值和離子存在會(huì)影響吸光值,但并不表示純度低。

 

去內(nèi)毒素質(zhì)粒小量提取試劑盒使用方法!

 

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