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氯乙suanAS-D萘酚酯酶染色實驗

發(fā)布時間: 2019-05-10  點擊次數(shù): 1265次

氯乙suanAS-D萘酚酯酶染色實驗
實驗方法原理:細胞內(nèi)酯酶水解合成的底物萘酚酯(一種萘的衍生物)而釋放出萘酚,并迅速與重氮鹽偶聯(lián)結(jié)果在酶活性部位有明亮色彩的沉淀物出現(xiàn)

實驗步驟:

一、實驗試劑:

(一)底物混合液

(1)0.067mol/L  磷酸鹽緩沖液(PH7.6)

(2)六偶氮化新品紅(hexoliaed  new   fuchsin)溶液(新鮮配制)

①溶解新品紅(new  fuchisn)1g于2mol/L鹽酸液25ml中,溶液可保存。

②40g/L亞硝酸鈉溶液,4℃保存,每周必須新鮮配制,使用前將等體積新品紅溶液和40g/L亞硝酸鈉溶液混合,反應1min此液好為六偶氮化新品紅

③氯乙suan萘酚AS-D液:取氯乙suan萘酚AS-D(naphthol AS-D hcloroacetate)5mg溶于N,N-二甲基酰胺N,N-dimeth for mamide)2.5ml中。

④將氯化萘酚AS-D溶液2.5ml和六偶氮化新品紅0.25ml加至0.067mol/L磷酸鹽緩沖液47.5ml中測PH值并調(diào)節(jié)至7.4不需要即可使用。

(二)復染液:取harris蘇木素(含少量明礬)復染液100ml,加冰乙酸4ml,混勻。

(三)稀氨水洗液:每100ml蒸餾水中加入濃氨水(28%)0.2-0.3ml混勻。

二、 實驗操作:

1. 將己固定好的血片或骨髓片放入底物混合液中,在高溫溫1育10min后,用流水沖洗.

2. 用復染液復染10min

3. 用稀氨水洗液沖洗玻片直至顏色由紅變藍

4. 迅速用流水沖洗,空氣中干燥后油鏡檢查。

三、 實驗結(jié)果判定:陽性反應為紅色顆粒.定位于胞漿中

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