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高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)檢測試劑盒樣本的處理方法!

發(fā)布時(shí)間: 2019-08-08  點(diǎn)擊次數(shù): 1532次

高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)檢測試劑盒樣本的處理方法!

 

高密度脂蛋白膽固醇(High density liptein cholesterol,HDL-C)主要在肝臟合成,是一種抗動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白,可將膽固醇從肝外組織轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行代謝,由膽汁排出體外,其血漿含量的高低與患心血管病的風(fēng)險(xiǎn)呈負(fù)相關(guān)  。

高密度脂蛋白可以從細(xì)胞膜上攝取膽固醇,經(jīng)卵磷脂膽固醇?;D(zhuǎn)移酶催化而成膽固醇酯,然后再將攜帶的膽固醇酯轉(zhuǎn)移到極低密度脂蛋白和低密度脂蛋白上。高密度脂蛋白中膽固醇含量比較固定,約含有人體膽固醇總量的20%~30%。

 

樣本處理:

血清(漿):直接測定,如超過線性范圍用生理鹽水稀釋后測定。

培養(yǎng)液樣本:吸取培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分,離心 10分鐘,取上清測定。[注]:一般建議細(xì)胞密度在 100萬個(gè)/ml以上。

組織樣本:準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積(ml)=1:9的比例,加入 9倍體積的勻漿介質(zhì),冰水浴條件下機(jī)械勻漿,2500轉(zhuǎn)/分,離心 10分鐘,取上清液待測。

[注]:1、如組織樣本為非高脂樣本,勻漿介質(zhì)統(tǒng)一用磷酸鹽緩沖液(0.1mol/L pH 7.4)或生理鹽水進(jìn)行提取。2、如組織樣本為高脂樣本或部分為高脂樣本,勻漿介質(zhì)可統(tǒng)一用無水乙醇進(jìn)行提取。

細(xì)胞樣本:A、細(xì)胞收集:將制備好的細(xì)胞懸液取出,1000轉(zhuǎn)/分,離心 10分鐘,棄上清液,留細(xì)胞沉淀;用等滲緩沖液( 0.1mol/L 、pH7~7.4 磷酸鹽緩沖液)清洗 1~2次,同樣 1000轉(zhuǎn)/分,離心 10分鐘,棄上清液,留細(xì)胞沉淀;B、細(xì)胞破碎:加入0.2~0.3ml的勻漿介質(zhì)(0.1mol/L、pH7~7.4磷酸鹽緩沖液或生理鹽水)進(jìn)行勻漿,冰水浴條件下超聲破碎(功率:300W,3~5秒/次,間隔30秒,重復(fù)3~5次)或手動(dòng)勻漿,制備好的勻漿液不離心待測。也可采用裂解液裂解( TritonX-100,1~2%,裂解 30~40分鐘),裂解好的液體不離心直接測定。 

 

生物療法:

生物療法是利用蛋白質(zhì)、DNA、抗體或其它從活組織中提取或合成的物質(zhì)獲得療效的方法。分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展已使重組蛋白作為藥物以非腸道應(yīng)用成為可能。

體內(nèi)試驗(yàn)中較的是由apoA-I Milano和磷脂復(fù)合物組成的載脂蛋白,給動(dòng)物模型和人類輸注這些載脂蛋白,結(jié)果證明減少了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。通過自身免疫方式產(chǎn)生針對(duì)膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的中和抗體也正在試驗(yàn),以降低LDL-C和增加HDL-C為目的的基因療法已初步建立起來。

因此,僅以升高HDL-C水平并非是開發(fā)HDL-C治療新措施的*目標(biāo)。一些新的治療措施是以進(jìn)一步增強(qiáng)HDL對(duì)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)作用為目標(biāo),直接的apoA-I治療和ABCA1,ABCG1基因表達(dá)調(diào)節(jié)研究正是這種新觀念的重要體現(xiàn)

 

高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)檢測試劑盒樣本的處理方法!

 

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