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PI 凋亡檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品詳情

發(fā)布時(shí)間: 2020-02-17  點(diǎn)擊次數(shù): 1043次

PI 凋亡檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品詳情

 

 
產(chǎn)品說(shuō)明:

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一,在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面都起到十分重要的作用。Annexin V 是一種分子量為 35.8 KD 的 Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白,能與細(xì)胞凋亡過(guò)程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸(Phosphatidylserine, PS)高親和力特異結(jié)合。FITC-Annexin V 結(jié)合到凋亡細(xì)胞后,在藍(lán)色光的激發(fā)下,發(fā)出綠色熒光,區(qū)分出凋亡細(xì)胞與正常細(xì)胞。碘化丙啶(Propidium iodide,PI)是一種核酸染料,它不能穿透完整細(xì)胞膜,但對(duì)凋亡晚期細(xì)胞和死細(xì)胞的破損細(xì)胞膜能夠穿透,并使細(xì)胞核紅染。將 FITC-Annexin V 與 PI 匹配使用,可以將凋亡早期的細(xì)胞和晚期的細(xì)胞區(qū)分開(kāi)來(lái)。



操作方法:


1、 用 27ml 的去離子水稀釋 3ml Binding Buffer(10×)至 30ml,每次用 3ml。

2、 收集細(xì)胞(1×106 個(gè)/次),然后用冷的 PBS 洗滌。(對(duì)于貼壁細(xì)胞,先用胰酶消化,再用 PBS 洗滌)。

3、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 懸浮細(xì)胞,300×g 離心 10min,棄上清。

4、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 重懸細(xì)胞,使細(xì)胞的密度達(dá)到 1×106 個(gè)/ml。

5、 每管加入 100μL 細(xì)胞(1×105 個(gè))。

6、 再向管中加入 5μL Annexin V-FITC。

7、 室溫,避光,輕輕地混勻,10min。

8、 加入 5μL PI,室溫,避光,孵育 5min。

9、 加入 PBS 至 500μL,輕輕混勻。

10、在 1 小時(shí)內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。1、 用 27ml 的去離子水稀釋 3ml Binding Buffer(10×)至 30ml,每次用 3ml。

2、 收集細(xì)胞(1×106 個(gè)/次),然后用冷的 PBS 洗滌。(對(duì)于貼壁細(xì)胞,先用胰酶消化,再用 PBS 洗滌)。

3、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 懸浮細(xì)胞,300×g 離心 10min,棄上清。

4、 用 1ml 1×的 Binding Buffer 重懸細(xì)胞,使細(xì)胞的密度達(dá)到 1×106 個(gè)/ml。

5、 每管加入 100μL 細(xì)胞(1×105 個(gè))。

6、 再向管中加入 5μL Annexin V-FITC。

7、 室溫,避光,輕輕地混勻,10min。

8、 加入 5μL PI,室溫,避光,孵育 5min。

9、 加入 PBS 至 500μL,輕輕混勻。

10、在 1 小時(shí)內(nèi)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
 

注意事項(xiàng):

1、旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2、Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物質(zhì),在保存與操作時(shí)請(qǐng)注意避光。

3、Propidium iodide(PI)能通過(guò)皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用。

4、在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免 PBS 殘留影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果

5、PI 染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首行 Annexin V-FITC 染色,上機(jī)前 5分鐘再加入 PI 染色。

6、整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在 4℃下操作。

 

PI 凋亡檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品詳情

 

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