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明膠酶譜法檢測(cè)試劑盒操作小貼士

發(fā)布時(shí)間: 2020-03-09  點(diǎn)擊次數(shù): 1672次

明膠酶譜法檢測(cè)試劑盒操作小貼士

 

1. 簡(jiǎn)介:
基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無活性的酶原形式分泌,活化后能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的膠原蛋白,又稱膠原酶。通過影響細(xì)胞外基質(zhì),膠原酶參與胚胎發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組織重塑等過程,并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經(jīng)等許多疾病過程。血漿與組織中的MMP-2、MMP-9參與各種生理與病理過程,其在診斷和治療中的意義日益受到重視。

 

2. 檢測(cè)原理:
本試劑盒采用酶譜法(Zymography)檢測(cè)MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測(cè)方法,其靈敏度可達(dá)1 nM,高于ELISA方法,其基本原理和程序是:制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE 凝膠,含蛋白酶的樣品在此凝膠中進(jìn)行電泳,電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Buffer 孵育,凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶條帶的位置,蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮區(qū)域,從而能同時(shí)指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液,可檢測(cè)少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性,檢測(cè)靈敏度~1nM。試劑盒可進(jìn)行50次標(biāo)準(zhǔn)小膠檢測(cè),如果小膠加樣孔為10~15個(gè),則總計(jì)可檢測(cè)500~750個(gè)樣品。

 

3. 檢測(cè)目的:
本試劑盒用于檢測(cè)MMP-2、MMP-9 酶譜及活性(Detect MMP2 and MMP9 as low as 1nM)。

 

4.試劑盒組成與儲(chǔ)存:
A. 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer 1.5 ml μl, −20 ºC;
B. 10 × Substrate G, 50 ml, −20 ºC;
C. 10 × Buffer A, 50 ml, 4 ºC, 使用時(shí)用蒸餾水稀釋;
D. 10 × Buffer B, 50 ml, 4 ºC, 使用時(shí)用蒸餾水稀釋;
E. SDS-PAGE 凝膠蛋白質(zhì)考馬斯亮藍(lán)染色液, 4 ºC。

 

說明:

1. 10 mM 能夠EDTA*抑制MMP活性。
2. 凝膠干燥:可使用聚丙烯酰胺凝膠干膠裝置室溫快速干燥凝膠,作為*記錄保留。

 

參考文獻(xiàn):
1. Nagase H and Woessner JF. Matrix Metalloproteinases. J Biol Chem, 1999, 274, 21491-21494
2. Heussen C, and Dowdle EB. Electrophoretic analysis of plasminogen activators in polyacrylamidegels containing sodium dodecyl sulfate and copolymerized substrates. Anal. Biochem,1980,102,196–202

 

明膠酶譜法檢測(cè)試劑盒操作小貼士

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