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羥自由基測定試劑盒現貨供應,歡迎選購

發(fā)布時間: 2020-04-22  點擊次數: 1165次

羥自由基測定試劑盒到貨了,歡迎選購


一、測定原理

Fenton反應是zui常見的產生羥自由基的化學反應,H2O2的量和Fenton反應產生的OH.量成正比,當給予電子受體后,用griess試劑顯色,形成紅色物質,其呈色與OH.的多少呈正比關系。

二、試劑組成與配制:(50T/48樣)

試劑一:3%H2O2標準品儲備液0.5ml×1支,4℃保存3個月。0.03%標準品應用液的配制:3%H2O2標準儲備液:蒸餾水=1:99稀釋,現用現配。

試劑二:底物儲備液1ml×1支,4℃保存3個月。

試劑三:甲液儲備液2ml×1支,4℃保存3個月,用時加蒸餾水1:9稀釋成應用液。
乙液7ml×2支,4℃保存3個月。

試劑三應用液的配制:甲液應用液與乙液等比例混合,用多少配多少,余下4℃保存。

試劑四:液體10ml×1瓶,用時加蒸餾水稀釋至100ml,制備成應用液,4℃保存。若有結晶,則放置37℃水浴至全部溶解后再稀釋。

試劑五:液體30ml×1瓶,避光4℃冰箱保存.

試劑六:液體30ml×1瓶,避光4℃冰箱保存.

試劑七:分析純的冰乙酸(冰醋酸)自備。

顯色劑的配制:試劑四應用液:試劑五:試劑六:冰乙酸=8:3:3:2,需多少配多少,現用現配。

注:抑制羥自由基的物質如:血清(漿)、各種組織勻漿液、口服液等;

產生羥自由基的物質如:中性白細胞、某些藥物、部分植物等。

三、操作:

以上配制好的應用液,先37℃水浴中預溫3分鐘,以下操作在37℃水浴中進行。


*:參考取樣量:血清(漿)樣本用生理鹽水20倍稀釋后取0.2ml作檢測;若您有微量移液器,可直接取0.010ml

血清(漿),再加0.190ml生理鹽水。組織勻漿上清,取0.2ml檢測。具體取樣量需您自己做預試確定,詳細預試方法見附錄。

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四、計算公式:

1、血清計算公式:

定義:規(guī)定每毫升血清(漿)在37℃下反應1 分鐘,使反應體系中H2O2 濃度降低1mmol/L

為一個抑制羥自由基能力單位。

抑制羥自由基能力(U/mL)=(對照OD 值-測定OD 值)/(標準OD 值-空白OD 值)×標準品

濃度(8.824mmol/L)×(1mL/取樣量) ×樣本測試前稀釋倍數

2、組織計算公式

定義:規(guī)定每毫克組織蛋白在37℃下反應1 分鐘,使反應體系中H2O2 濃度降低1mmol/L 為

一個抑制羥自由基能力單位。

抑制羥自由基能力(Uprot)=(對照OD 值-測定OD 值)/(標準OD 值-空白OD 值)×標

準品濃度(8.824mmol/L)÷[待測樣本蛋白濃度(mgprot/mL)×取樣量(0.2mL)]


3、產生羥自由基能力的計算公式:

定義:規(guī)定每毫升或每毫克物質或每立方厘米內106 個細胞在本反應體系中使反應液中H2O2

濃度增加1mmol/L 為一個抑制羥自由基能力單位。

抑制羥自由基能力(U/mL)=(測定OD 值-對照OD 值)/(標準OD 值-空白OD 值)×標準品

濃度(8.824mmol/L)×(1mL/取樣量) ×樣本測試前稀釋倍數

五、注意點:

1.       必須每一支管子單獨做,并且反應時間一分鐘一定要準確。

2.       必須嚴格按照操作表順序加試劑,不可配制混合試劑。

3.       檢驗樣本溶劑或介質可為生理鹽水、蒸餾水、醋酸、無水乙醇,但不能為磷酸緩沖液。

4.       此法檢測靈敏度較高,檢測血清(漿)和組織以外樣本時,先取原液及不同濃度稀釋后的樣本,

例如5倍稀釋液或10倍稀釋液做預試。如測定管顏色太淺可將樣本用其溶劑繼續(xù)稀釋至顏色深為止。

我所曾檢測花粉的水提液的活性氧,將其原液稀釋150倍后,顯色較好。

 

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