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信帆生物-明膠酶譜法試劑盒檢測(cè)小技巧

發(fā)布時(shí)間: 2020-05-14  點(diǎn)擊次數(shù): 1547次

信帆生物-明膠酶譜法試劑盒檢測(cè)小技巧

    
基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無活性的酶原形式分泌,活化后能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的膠原蛋白,又稱膠原酶。通過影響細(xì)胞外基質(zhì),膠原酶參與胚胎發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組織重塑等過程,并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經(jīng)等許多疾病過程。血漿與組織中的MMP-2、MMP-9參與各種生理與病理過程,其在診斷和治療中的意義日益受到重視。


檢測(cè)原理

本試劑盒采用酶譜法(Zymography)檢測(cè)MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測(cè)方法,其靈敏度可達(dá)1 nM,高于ELISA方法,其基本原理和程序是:制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE 凝膠,含蛋白酶的樣品在此凝膠中進(jìn)行電泳,電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Buffer 孵育,凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶條帶的位置,蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮區(qū)域,從而能同時(shí)指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液,可檢測(cè)少至0.1~0.5μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性,檢測(cè)靈敏度~1nM。試劑盒可進(jìn)行50次標(biāo)準(zhǔn)小膠檢測(cè),如果小膠加樣孔為10~15個(gè),則總計(jì)可檢測(cè)500~750個(gè)樣品。
 

實(shí)驗(yàn)中的小貼士告訴大家:

1.做酶譜要測(cè)定樣品蛋白的濃度(同Western blot,建議用BCA法);

2.酶譜法是測(cè)定樣品中MMP-2、9活性的,如果煮沸使蛋白變性就沒有用了,故禁忌煮沸;

3.上樣緩沖液中也不能加β-巰基乙醇,這點(diǎn)由western blot轉(zhuǎn)作明膠酶譜的朋友切記、切記;

4.蛋白上樣量必須保證一樣,不會(huì)出現(xiàn)一致的透明條帶,如果不能保證上樣量一致,測(cè)出的相對(duì)活性也沒有統(tǒng)計(jì)分析的意義;

5.上樣時(shí)zui重要的一點(diǎn),必須在4℃環(huán)境中操作,我用的是冰臺(tái),同時(shí)所用的蛋白樣品(-80℃冰箱)不能是以前曾解凍使用過的,必須是新取出的,因?yàn)橹灰鈨鼍蜁?huì)有部分酶降解,影響你的結(jié)果。此外做過一次酶譜的蛋白樣品也不要反復(fù)使用,下次應(yīng)使用其它已分裝、未解凍過的樣品;

6.電泳后的步驟很簡(jiǎn)單,液體別配錯(cuò),照著方法做就可以了。

 

如果你曾做過Western blot,在這里恭喜你了,只要注意幾個(gè)小細(xì)節(jié),明膠酶譜對(duì)你非常簡(jiǎn)單。

 

購(gòu)買我司試劑盒可以提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),客戶準(zhǔn)備好樣本,上海和南京地區(qū)的客戶可以提供免費(fèi)上門取樣服務(wù)。其他地區(qū)的客戶,樣本用泡沫箱子包好,放干冰或者冰袋寄送給我們。代測(cè)時(shí)間為5到7個(gè)工作日提供原始數(shù)據(jù),分析數(shù)據(jù), 實(shí)驗(yàn)操作步驟以及實(shí)驗(yàn)所用儀器。


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