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維生素 B6 檢測(cè)試劑盒操作簡(jiǎn)單,效果好

發(fā)布時(shí)間: 2020-08-17  點(diǎn)擊次數(shù): 1037次

維生素 B6 檢測(cè)試劑盒操作簡(jiǎn)單,效果好

 

 

維生素 B6(Vitamin B6)又稱吡哆素,其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,在體內(nèi)以磷酸酯的形式存在,是一種水溶性維生素,肉類、全谷類、蔬菜和堅(jiān)果類中含量較高。在機(jī)體中參與多種蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝,對(duì)生物體具有極其重要的作用。
 

VB6 與 4-氨基安替比林在強(qiáng)氧化劑作用下生成穩(wěn)定的黃色化合物,在 400nm 有特征吸收峰??梢?jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器EP 管、冰和蒸餾水。
 

一、粗酶液提?。?br />組織:將樣品磨碎,按照質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g,加
入 0.6mL 提取液)加入提取液,60℃浸提 30min,加蒸餾水 0.4mL,混勻后于 25℃,16000rpm 離心
10min,取上清測(cè)定(動(dòng)物組織及其他蛋白含量較高的樣本建議離心 20-30 分鐘或反復(fù)離心 2-3 次至
上清無(wú)混濁)。
 

細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加
入 0.6mL 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min);加蒸
餾水 0.4mL,混勻后于 25℃,16000rpm 離心 10min,取上清測(cè)定。
 

液體:直接檢測(cè)。
 

二、測(cè)定步驟:
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 400nm,蒸餾水調(diào)零。
2、將 10mg/mL(10000μg/mL)標(biāo)準(zhǔn)液用試劑一稀釋為 500、250、125、62.5、31.2515.625 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

三、維生素 B6 含量計(jì)算:
1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:
以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為 x 軸,其對(duì)應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b,將△A 帶入方程得到 x(μg/mL)
2、 維生素 B6 含量的計(jì)算:
(1)按蛋白濃度計(jì)算
VB6(μg prot)= x×V 提取÷(V 提取×Crp)= x÷Cpr
(2)按樣本質(zhì)量計(jì)算
VB6(μg/g 鮮重)= x×V 提取÷W=x÷W
(3)按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VB6(μg/104 cell)= x×V 提取÷細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))=x÷細(xì)胞數(shù)量(萬(wàn)個(gè))
(4)按液體體積計(jì)算
VB6(μg/mL)= x×V 提取÷V 提取= x
V 提取:提取液體積,1mL; V 樣:加入的樣品體積,0.04mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;
W:樣本質(zhì)量,g。
1、 A 大于 1.2 時(shí),建議將樣品用試劑一稀釋后再進(jìn)行測(cè)定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
2、 蛋白濃度較高的樣品,比如動(dòng)物組織、豆類種子等,若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生,將樣本稀釋后再測(cè)定,在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3、 顯色完成后立即進(jìn)行測(cè)定,盡量保證反應(yīng)時(shí)間一致。

注意:

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、診斷或治療,食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。

2. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和kou操作。

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