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中性蛋白酶也稱為分散酶,作用迅速有效又溫和

發(fā)布時(shí)間: 2020-08-21  點(diǎn)擊次數(shù): 3030次

中性蛋白酶也稱為分散酶,作用迅速有效又溫和

 

Dispase中文名稱為中性蛋白酶,也稱為分散酶,是一種非特異性的金屬蛋白酶,被用來(lái)從各種不同組織或器官中消化細(xì)胞外基質(zhì),釋放并制備原代單細(xì)胞;或用于細(xì)胞培養(yǎng)中的細(xì)胞收獲或接種轉(zhuǎn)移;也被用于防止懸浮細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)的細(xì)胞意外結(jié)團(tuán)。

蛋白水解酶類,如胰蛋白酶、膠原酶和鏈酶蛋白酶都被用語(yǔ)來(lái)分散組織、分類細(xì)胞,但他們常傷害細(xì)胞,并且在培養(yǎng)時(shí)不穩(wěn)定,甚至可能引入支原體污染。Dispase就沒有這個(gè)問(wèn)題,不會(huì)給細(xì)胞膜帶來(lái)傷害,而且因?yàn)槠鋪?lái)自細(xì)菌,故不會(huì)引入支原體或任何動(dòng)物病毒;溫度、pH、血清成分等的差異對(duì)Dispase影響很小。Dispase經(jīng)稀釋后其活性就大大降低,這也方便了后續(xù)的培養(yǎng)。Dispase甚至被加入細(xì)胞培養(yǎng)懸液中用于防止細(xì)胞團(tuán)結(jié)。

 

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優(yōu)勢(shì):

該酶已被證實(shí)作用迅速有效又溫和;

細(xì)胞能保持完整,細(xì)胞膜無(wú)損;

該酶非哺乳動(dòng)物來(lái)源,不含支原體或動(dòng)物病毒污染;

對(duì)于溫度、pH的改變、以及血清成分都很穩(wěn)定;

 

使用螯合劑或稀釋就能簡(jiǎn)單滅活;

酶活定義:

1U是在檢測(cè)條件下1分釋放相當(dāng)于1 umol酪氨酸的Folin陽(yáng)性氨基酸或肽的酶量;DispaseII:≥0.8 U (37℃,使用酪蛋白作為底物,pH 7.5);1U Dispase II基本相當(dāng)于600U日本單位的Dispase。

抑制劑: EDTA、EGTA、Hg2+、其他重金屬。血清不會(huì)抑制酶活性。

 

使用方法:

用Hepes-buffered saline (50 mM Hepes/KOH pH 7.4, 150 mM NaCl)溶解Dispase至10 mg/ml,使用時(shí)用細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋到0.6-2.4 U/ml。不高于2.4 U/ml的 工作濃度,可用0.22 um的無(wú)菌濾膜過(guò)濾除菌。

 

保存方法:

保存在2-8℃;配成溶液后,在2-8℃ 2周內(nèi)使用有效,在-20°2個(gè)月內(nèi)使用有效;不要反復(fù)凍融;儲(chǔ)存液用Hepes鹽緩沖液稀釋后,2-8℃,3天內(nèi)使用有效。

 

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