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多酚氧化酶試劑盒正確使用!

發(fā)布時(shí)間: 2021-08-23  點(diǎn)擊次數(shù): 1211次

 多酚氧化酶試劑盒正確使用!

黃至暗褐色粉末或液體。編號(hào):EC 1.10.3.1。催化鄰苯二酚氧化成鄰苯二醌,也能作用于單酚單加氧酶的底物   。淡黃至暗褐色粉末或液體。溶于水,不溶于乙醇。有吸濕性。相對(duì)分子質(zhì)量約為125000,適pH為6.5,適溫度為2℃

PPOEC1.10.3.1)主要存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是一種含銅的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化產(chǎn)生醌,從而引起褐化,與果蔬加工、茶葉品質(zhì)和組培等密切相關(guān)。

酶蛋白具有一般蛋白質(zhì)的特性,在高溫或低溫條件下有易變性失活的特點(diǎn)。各類(lèi)酶均有其活性的適溫度范圍,一般在30C~50℃范圍內(nèi)酶活性*。酶若失活、變性,則就喪失了催化能力。酶的催化作用具有專(zhuān)一性,如多酚氧化酶,只能使茶多酚物質(zhì)氧化,聚合成茶多酚的氧化產(chǎn)物茶黃素、茶紅素和茶褐素等;蛋白酶只能促使蛋白質(zhì)分解為氨基酸。茶葉加工就是利用酶具有的這種特性,用技術(shù)手段鈍化或激發(fā)酶的活性,使其沿著茶類(lèi)所需的要求發(fā)生酶促反應(yīng)而獲得各類(lèi)茶*的色香味。如綠茶加工過(guò)程中的殺青就是利用高溫鈍化酶的活性,在短時(shí)間內(nèi)制止由酶引起的一系列化學(xué)變化,形成綠葉綠湯的品質(zhì)特點(diǎn)。紅茶加工過(guò)程中的發(fā)酵就是激化酶的活性,促使茶多酚物質(zhì)在多酚氧化酶的催化下發(fā)生氧化聚合反應(yīng),生成茶黃素、茶紅素等氧化產(chǎn)物,形成紅茶紅葉紅湯的品質(zhì)特點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)所需儀器:

可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1、收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10分鐘,取上清,置冰上待測(cè)。

2、稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10分鐘,取上清,置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至525nm,蒸餾水調(diào)零。

2、樣本測(cè)定(在EP管中依次加入下列試劑)

試劑名稱(chēng)(μL)

測(cè)定管

對(duì)照管

試劑一

200

100

試劑二

50

50

樣本

50


煮沸的樣本


50

37℃(哺乳動(dòng)物)25℃(其它物種)中準(zhǔn)確水浴10min后,迅速放入冰浴中冷卻



試劑三

100

100

充分混勻,5000g,常溫離心10min,收集上清,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,525nm處檢測(cè)測(cè)定管和對(duì)照管吸光度,計(jì)算ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。


本產(chǎn)品只供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其它用途!




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