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甘油含量檢測(cè)試劑盒-甘油濃度測(cè)定

發(fā)布時(shí)間: 2022-03-18  點(diǎn)擊次數(shù): 1079次

甘油含量檢測(cè)試劑盒-甘油濃度測(cè)定


甘油是甘油三酯的水解產(chǎn)物。脂蛋白酯酶能水解血液中的甘油三酯;胰脂酶可以水解食物中的甘油三酯;激素敏感脂肪分解酶能水解脂肪細(xì)胞中的甘油三酯。與游離脂肪酸一樣,甘油含量是甘油三酯水解反應(yīng)的可靠檢測(cè)指標(biāo),但檢測(cè)更方便。本試劑盒采用甘油磷酸氧化酶法和經(jīng)典GPO-Trinder酶學(xué)反應(yīng)相結(jié)合的方法,通過比色法測(cè)定液體樣本中的甘油含量。經(jīng)過優(yōu)化后,操作步驟更加簡(jiǎn)單,檢測(cè)線性范圍在10-1200µmol/L,可靠性和重復(fù)性俱佳,適合生物醫(yī)學(xué)、食品實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。


甘油濃度測(cè)定:

參見下表進(jìn)行加樣。為使反應(yīng)時(shí)間盡量一致,減小實(shí)驗(yàn)誤差,可先加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品,然后再加入工作溶液。(注意:當(dāng)甘油濃度較低時(shí),可將待測(cè)樣品與工作溶液按照100µl:100µl體積混合,然后再進(jìn)行測(cè)定,但是如果樣品體積超過100µl時(shí)將會(huì)稀釋工作液中酶的濃度,使反應(yīng)靈敏度下降。如果待測(cè)樣品濃度超過線性范圍,可進(jìn)行適當(dāng)稀釋,然后根據(jù)稀釋倍數(shù)來計(jì)算樣品中甘油濃度。)

37oC或25oC反應(yīng) 10分鐘。反應(yīng)平衡后顏色在60分鐘內(nèi)穩(wěn)定。

先用蒸餾水+工作液的空白管調(diào)零,然后測(cè)定各管OD值。

繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算甘油濃度。

附Excel作圖步驟:各標(biāo)準(zhǔn)管OD值為y軸,標(biāo)準(zhǔn)品濃度為x軸。(1)鼠標(biāo)左鍵圈住數(shù)據(jù),點(diǎn)擊做圖向?qū)?,選擇-散點(diǎn)圖-,點(diǎn)擊-完成-。(2)鼠標(biāo)右鍵點(diǎn)圖上的某一點(diǎn),點(diǎn)擊-添加趨勢(shì)線-,點(diǎn)擊-選項(xiàng)-,點(diǎn)擊-顯示公式-和-R2值-。


說明:

1、維sheng素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測(cè)試。

2、正常血清甘油濃度為20-130µmol/L,細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)須用不含酚紅的無色無血清培養(yǎng)基,如果培養(yǎng)基中含有酚紅,可以選擇含有酚紅的無細(xì)胞培養(yǎng)基作為對(duì)照進(jìn)行測(cè)定


強(qiáng)堿條件下甘油和二價(jià)銅的絡(luò)合物顯絳藍(lán)色,所以利用甘油的這個(gè)特性就可以輕松搞定。主要試劑是AR級(jí)的甘油、氫氧化鈉、硫酸銅。向氫氧化鈉堿化的甘油溶液里加硫酸銅,一定要保證甘油被*絡(luò)合,并且保證多余的二價(jià)銅都以氫氧化銅沉淀形式存在,但是氫氧化鈉也不要加太多。甘油銅可見區(qū)大吸收波長(zhǎng)是在630nm。先作個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列,繪出吸光度-濃度曲線,然后把待測(cè)試樣吸光度測(cè)出來在標(biāo)準(zhǔn)曲線上一算,濃度就得到了。


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