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高脂樣本蛋白裂解液使用注意事項(xiàng)

發(fā)布時(shí)間: 2023-01-05  點(diǎn)擊次數(shù): 1142次

高脂樣本蛋白裂解液使用注意事項(xiàng)

 

描述:
高脂樣本蛋白裂解液采用優(yōu)化配比,特別適用于脂質(zhì)含量高的樣本,對(duì)動(dòng)物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分有較強(qiáng)裂解作用,使用高脂樣本蛋白裂解液特別適于提取膜蛋白以及western blot實(shí)驗(yàn)等


儲(chǔ)存:
4 ℃保存 12個(gè)月有效


制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物
1. 800g 4℃離心5分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞,估計(jì)細(xì)胞離心后的體積(PCV, 106 cells=~20 ml, 107 cells =~100 ml PCV);
2. 每50-100 ml PCV加入5倍體積RIPA裂解緩沖液(250-500 ml),冰浴中放置10分鐘,并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒;
3. 12000g 4℃離心10分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中,即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物;
4. 假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠,95℃加熱5分鐘,然后迅速冰浴5分鐘,12000g 4℃離心10分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中,即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物。


制備組織裂解產(chǎn)物
1. 取50-100 mg組織在冰上剪成碎片,用預(yù)冷的PBS洗滌2次離心棄去PBS;
2. 加入 0.5-1 ml 預(yù)冷 RIPA 裂解緩沖液;
3. 4℃用玻璃勻漿器勻漿20-40次,直到95%的細(xì)胞被破碎,然后在冰浴中放置10分鐘,并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒;
4. 12000g 4℃離心10分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中,即得組織總蛋白產(chǎn)物;
5. 假如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠,95℃加熱5分鐘,然后迅速冰浴5分鐘,12000g 4℃離心10分鐘,將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中,即得組織總蛋白產(chǎn)物;
6. 20%的甘油保存于 -70oC 或-20oC。


注意:
1. 在轉(zhuǎn)移上清液時(shí)不要吸入底部的沉淀物;
2. 高脂樣本蛋白裂解液中未加入蛋白酶抑制劑。
 

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