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芽孢染色液各種方法均有銷售,歡迎訂購(gòu)!
芽孢染色液(Scharffer-Fulton法) 2×20ml
芽孢染色液(Scharffer-Fulton法) 2×50ml
芽孢染色液(Moeller法) 3×20ml
芽孢染色液(Moeller法) 3×50ml
芽孢是芽孢桿菌屬和梭菌屬生長(zhǎng)到一定階段形成的一種抗逆性很強(qiáng)的休眠體結(jié)構(gòu),通常為圓形或橢圓形。
芽孢壁厚、透性低,著色、脫色均較困難。因此,用著色力強(qiáng)的染色劑(如孔雀石綠)在加熱條件下進(jìn)行染色時(shí),染料不僅可以進(jìn)入菌體,而且也可以進(jìn)入芽孢,進(jìn)入菌體的染料可經(jīng)水洗脫色,而進(jìn)入芽孢的染色的染料則難以透出,若再用復(fù)染液(如沙黃水溶液)染色后,芽孢仍然保留初染劑的顏色,而菌體被染成復(fù)染劑的顏色,即菌體和芽孢分別染成紅色和綠色易于區(qū)分。
方法1
(1)將培養(yǎng)24小時(shí)左右的枯草芽孢桿菌或其他芽孢桿菌,作涂片、干燥、固定。
(2)滴加3—5滴孔雀綠染液于已固定的涂片上。
(3)用木夾夾住載玻片在火焰上加熱,使染液冒蒸汽但勿沸騰,切忌使染液蒸干,必要時(shí)可添加少許染液。加熱時(shí)間從染液冒蒸汽時(shí)開始計(jì)算約4—5分鐘。這一步也可不加熱,改用飽和的孔雀綠水溶液(約7.6%)染10分鐘。
(4)傾去染液,待玻片冷卻后水洗至孔雀綠不再褪色為止。
(5)用番紅水溶液復(fù)染1分鐘,水洗至水為無(wú)色。
(6)待干燥后,置油鏡觀察,芽孢呈綠色,菌體呈紅色。
注意
(1)選用適當(dāng)菌齡的菌種,幼齡菌尚未形成芽孢,而老齡菌芽孢囊已經(jīng)破裂。
(2)加熱染色時(shí)必須維持在染液冒蒸汽的狀態(tài),加熱沸騰會(huì)導(dǎo)致菌體或芽孢囊破裂,加熱不夠則芽孢難以著色。
方法2
(1)取二支潔凈的小試管,分別加入0.2ml無(wú)菌水,再往一管中加入1—2接種環(huán)的蠟狀芽孢桿菌的菌苔,另 一管中加入1—2接種環(huán)的生孢梭菌的菌苔,兩管各自充分混合成濃厚的菌懸液。
(2)在菌懸液中分別加入0.2ml苯酚品紅溶液,充分混合后,于沸水浴中加熱3—5分鐘。
(3)用接種環(huán)分別取上述混合液2—3環(huán)于兩片載玻片上,涂薄,風(fēng)干后,將載玻片稍傾斜于燒杯上,用95%乙醇沖洗至無(wú)紅色液流出。
(4)再用自來(lái)水沖洗,濾紙吸干。
(5)取1—2接種環(huán)黑色素溶液于涂片處,立即展開涂薄,自然干燥后,油鏡觀察,在淡紫灰色背景的襯托下,菌體為白色,菌體內(nèi)的芽孢為紅色。
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