明膠酶譜法分析試劑盒廠家現(xiàn)貨

產(chǎn)品簡介：

基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以無活性的酶原形式分泌，活化后能夠降解細胞外基質(zhì)的膠原蛋白，又稱膠原酶。通過影響細胞外基質(zhì)，膠原酶參與胚胎發(fā)育、形態(tài)發(fā)生、組織重塑等過程，并參與炎癥、腫瘤、心血管、神經(jīng)等許多疾病過程。血漿與組織中的MMP-2、MMP-9參與各種生理與病理過程，其在診斷和治療中的意義日益受到重視。

酶譜法的基本過程是先將樣品進行SDS-聚丙烯酰胺（SDS-PAGE，含0.1%明膠）電泳分離，然后在有二價金屬離子存在的緩沖系統(tǒng)中使樣品中的MMP-2和MMP-9恢復(fù)活性，在各自的遷移位置水解凝膠里的明膠，后用考馬斯亮藍將凝膠染色，再脫色，在藍色背景下可出現(xiàn)白色條帶，條帶的強弱與MMP-2和MMP-9活性成正比

原理：
復(fù)性原理：在電泳過程中，SDS與樣品中的MMPs結(jié)合（當然是可逆性結(jié)合），破壞其氫鍵、疏水鍵而使MMPs不能發(fā)揮其分解明膠的作用，而只有當將膠置Triton中洗脫（要是放在搖床上搖，30min/次，做2次或15min/次，4次。靜置于Trition中是不妥的。）時，由于SDS被Triton結(jié)合而去除，從而使MMPs恢復(fù)了活性。

試劑盒組成與儲存：
A. 2 × SDS-PAGE non-reducing buffer 1.5 ml μl, −20 ºC；
B. 10 × Substrate G, 50 ml, −20 ºC；
C. 10 × Buffer A, 50 ml, 4 ºC, 使用時用蒸餾水稀釋；
D. 10 × Buffer B, 50 ml, 4 ºC, 使用時用蒸餾水稀釋；
E. SDS-PAGE 凝膠蛋白質(zhì)考馬斯亮藍染色液, 4 ºC。

注意事項：
1.制備聚丙烯酰胺凝膠時應(yīng)注意排除氣泡 。
2.明膠酶譜的活性受鈣離子，鋅離子，和pH值等因素的影響，因此緩沖液配制應(yīng)嚴格準確，盡量用超純水，孵育溫度也掌握好。
3.用大梳子。
4.孵育液的pH要在7.5-7.6，復(fù)性的Triton時間長了會有絮狀物，所以實驗時盡量使用新鮮配置的。
5.孵育的37℃不要在CO2培養(yǎng)箱中，因為會改變孵育液的pH值，在普通孵箱即可。
6.明膠要4℃保存，配好后1周內(nèi)使用

文獻支持：
綠茶多酚EGCG增強動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性及其相關(guān)機制研究