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谷氨酸合成酶(GOGAT)試劑盒使用手冊(cè)

發(fā)布時(shí)間: 2021-01-26  點(diǎn)擊次數(shù): 742次
谷氨酸合成酶(GOGAT)試劑盒使用手冊(cè)


產(chǎn)說(shuō)明:
GOGAT 主要存在于原核生物、酵母菌及高等植物非綠色組織的質(zhì)體中,和谷氨酰胺合成酶(GS)共同構(gòu)成 GS/GOGAT 循環(huán),參與氨同化的調(diào)控。GOGAT 以 NADH 為電子供體,催化谷氨酰胺的氨基轉(zhuǎn)移到α-酮戊二酸形成兩分子的谷氨酸,NADH 在 340nm 吸光度的下降速率可以反映 GOGAT 活性大小。


試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:
紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 石英比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

 
、粗酶液提取:
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);10000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱(chēng)取約 0.1g 組織,加入 1mL
提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定步驟:
1、 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 工作液提配置,平衡至室溫。
3、 樣本測(cè)定

 
注意事項(xiàng):
1、測(cè)定期間樣本在冰上放置,以免變性和失活。
2、好兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn),個(gè)人比色,個(gè)人計(jì)時(shí),以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
3、當(dāng) A1 大于 1.5 或者ΔA 大于 0.6 時(shí),建議將樣用蒸餾水稀釋后測(cè)定,當(dāng)ΔA 過(guò)小時(shí),可以延長(zhǎng)酶
促反應(yīng)時(shí)間(10min 或 15min)或者加大加入的樣體積進(jìn)行測(cè)量。
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