T4 DNA聚合酶使用詳情

T4 DNA Polymerase在模板以及引物存在的條件下，沿5’-3’方向催化合成DNA，T4 DNA Polymerase具有3'→5'外切酶活性，但不具有5'→3'外切酶活性。運(yùn)輸和儲存方法。

聚合酶（polymerase）又稱多聚酶。是專門生物催化合成脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的一類酶的統(tǒng)稱。

可分為以下幾個(gè)類群:(1)依賴DNA的DNA聚合酶；(2)依賴RNA的DNA聚合酶；(3)依賴DNA的RNA聚合酶；(4)依賴RNA的RNA聚合酶。前兩者是DNA聚合酶，它使DNA復(fù)制鏈按模板順序延長。如在原核生物中僅就大腸桿菌中已被發(fā)現(xiàn)的就有三種(分別簡稱為PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；DNA聚合酶只能在有引物的基礎(chǔ)上，即在DNA或RNA引物的3′-OH延伸，這DNA的合成方向記為5′→3′。換言之DNA聚合酶催化反應(yīng)除底物(αNTP)外，還需要Mg2+ 、模板DNA和引物，迄今細(xì)胞內(nèi)尚無發(fā)現(xiàn)可從單體起始DNA的合成。

干冰運(yùn)輸。

-20℃保存。有效期一年。

應(yīng)用

T4 DNA Polymerase可用于催化以下反應(yīng)：DNA 5'或3'突出末端的平滑化

通過置換反應(yīng)進(jìn)行標(biāo)記DNA探針合成

定點(diǎn)突變過程中第二鏈的合成

不依賴于連接反應(yīng)的PCR產(chǎn)物克隆

單位定義

37℃、30分鐘內(nèi)催化10 nmol脫氧核糖核苷酸（dNTPs）摻入到多聚核苷酸中所需要的酶量，定義為1個(gè)活性單位 (U)。