瓊脂糖凝膠4B 操作小貼士

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：瓊脂糖凝膠4B瓊脂糖凝膠4B 是用4%濃度瓊脂糖制備成的球型顆粒，作為凝膠層析介質(zhì)使用。本品為乳白色球狀凝膠，無(wú)嗅、無(wú)味、無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)。 

保存：
產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4℃~25℃（保存溶液為20%乙醇），通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。用過(guò)的柱子貯存在4℃（20%乙醇）。本品應(yīng)避免與氧化劑接觸，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中。

操作說(shuō)明：
本產(chǎn)品為傳統(tǒng)的瓊脂糖介質(zhì)，非特異性吸附低，回收率高，可多次重復(fù)使用等特點(diǎn)，用于分子量差異大、對(duì)分辨率要求不高的樣品的凝膠層析純化。
1. 裝柱
凝膠過(guò)濾介質(zhì)的使用對(duì)裝柱的要求較高，為了保證分離效果，一般通過(guò)柱子上加一個(gè)裝柱器來(lái)使分離柱裝滿凝膠，或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進(jìn)行檢驗(yàn)。以下過(guò)程為通用介質(zhì)裝填過(guò)程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子，可在柱床穩(wěn)定后將柱床壓緊，接好管路。
(1) 讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。
(2) 選擇一根一定直徑的柱子，長(zhǎng)約30~60cm，根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠（約為柱床體積的1.15 倍），清洗掉20%乙醇，抽干，用緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1 的比例）配成勻漿。不要?jiǎng)×覕噭?dòng)，以免攪壞微球。
(3) 將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務(wù)必使底端無(wú)氣泡。
(4) 用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。
(5) 打開(kāi)蠕動(dòng)泵，讓緩沖液緩慢流過(guò)，使柱床穩(wěn)定。
(6) 最好用一個(gè)裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平，上好柱頭。
2. 平衡
讓緩沖液以一定流速流過(guò)柱子，到流出液電導(dǎo)和pH 不變。
3. 上樣
(1) 樣品用緩沖液配制，渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。含鹽量過(guò)大、濃度過(guò)小的樣品要先做處理，再上樣。
(2) 介質(zhì)對(duì)樣品組分的分離是按組分分子量大小進(jìn)行的，分子量大的先流出來(lái)。
(3) 上樣體積約為柱體積的1~2%，越小分離越好。
4. 洗脫
用緩沖液洗脫，洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。
5. 再生
一般用緩沖液洗到平衡，可再次使用。
6. 注意
在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候，始終要避免柱子流干氣泡進(jìn)入。