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蛋白質(zhì)羰基含量測(cè)試盒的實(shí)驗(yàn)注意點(diǎn)

發(fā)布時(shí)間: 2023-12-11  點(diǎn)擊次數(shù): 236次

蛋白質(zhì)羰基含量測(cè)試盒的實(shí)驗(yàn)注意點(diǎn)

(紫外比色法)

一、試劑組成和配制(50 /24 樣,貨號(hào) A087-1-1):

試劑一:勻漿介質(zhì),無色透明液體,50mL×1 瓶;4℃保存;

試劑二:淺磚紅色液體,2.5mL×1 瓶;4℃避光保存;

試劑三:黃色液體,10mL×1 瓶;4℃避光保存;

試劑四:無色液體,10mL×1 瓶;4℃保存;

試劑五:無色液體,30mL×1 瓶;4℃保存;

試劑六:無色液體,70mL×1 瓶;4℃保存;

自備試劑:無水乙醇(分析純);乙酸乙酯(分析純);

洗滌液的配制:將無水乙醇和乙酸乙酯按照體積比 11

的比例混合配置成溶液,現(xiàn)用現(xiàn)配;

二、試劑組成和配制(100 /48 樣,貨號(hào) A087-1-2):

試劑一:勻漿介質(zhì),無色透明液體,100mL×1 瓶;4℃保存;

試劑二:淺磚紅色液體,5mL×1 瓶;4℃避光保存;

試劑三:黃色液體,20mL×1 瓶;4℃避光保存;

試劑四:無色液體,20mL×1 瓶;4℃保存;

試劑五:無色液體,60mL×1 瓶;4℃保存;

試劑六:無色液體,70mL×2 瓶;4℃保存;

自備試劑:無水乙醇(分析純);乙酸乙酯(分析純);

洗滌液的配制:將無水乙醇和乙酸乙酯按照體積比 11

的比例配置成混合溶液,現(xiàn)用現(xiàn)配;

三、操作步驟:

1、血清(漿)前處理:取血清或血漿原液進(jìn)行測(cè)定(同時(shí)用

雙縮脲試劑盒(本所有售,貨號(hào) A045-1)測(cè)定血清(漿)

中總蛋白濃度);

2、組織樣本前處理:準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量(g):體積

(mL)=1的比例加入 倍的試劑一(如準(zhǔn)確稱取組織

重量 0.1g 加入 0.9mL 的試劑一),冰水浴條件下機(jī)械勻

漿,2500 轉(zhuǎn)/,離心 10min,取上清即 10%勻漿 450µL,

加入 50µL 試劑二,混勻,室溫放置 10min 后,

11000r/min

離心 10min,取上清按操作表測(cè)定(同時(shí)取部分上清用考

馬斯亮藍(lán)試劑盒(本所有售,貨號(hào) A045-2)測(cè)定勻漿的

總蛋白濃度);

四、測(cè)定意義:

一種檢測(cè)蛋白質(zhì)羰基含量的試劑盒??珊啽?、靈敏的

檢測(cè)各種組織器官、血清、培養(yǎng)細(xì)胞(做法同組織樣本)

和細(xì)胞器等蛋白質(zhì)羰基含量。其使用不需要昂貴的設(shè)備,

樣品處理簡單,可廣泛應(yīng)用于各種疾病如衰老、動(dòng)脈硬化

癥,糖尿病和帕金森綜合癥、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病的早期

診斷,抗氧化保健食品、抗氧化藥物和化妝品等的評(píng)價(jià),

還可以用于評(píng)價(jià)由于一些環(huán)境有害因子如輻射、化學(xué)毒物

等對(duì)機(jī)體造成的氧化損傷。

五、實(shí)驗(yàn)注意點(diǎn):

1、在用無水乙醇乙酸乙酯混合應(yīng)用液對(duì)反應(yīng)沉淀進(jìn)行洗

滌時(shí),漩渦混勻一定要?jiǎng)×页浞?,混勻時(shí)間不得少于一

分鐘,反應(yīng)沉淀物必須洗滌至白色,如果沉淀物還有黃

色殘留,適當(dāng)增加無水乙醇乙酸乙酯混合應(yīng)用液的洗滌

次數(shù),以保證洗滌充分,否則會(huì)使得測(cè)定結(jié)果偏高;

2、在進(jìn)行蛋白質(zhì)羰基測(cè)定時(shí),離心的轉(zhuǎn)速不可以隨意降

低,否則會(huì)使得測(cè)定結(jié)果偏高;

3在進(jìn)行蛋白質(zhì)羰基測(cè)定時(shí),建議使用圓底的離心管進(jìn)

行實(shí)驗(yàn),這樣在進(jìn)行無水乙醇乙酸乙酯混合應(yīng)用液洗滌

時(shí),可以保證沉淀被充分洗滌。不建議使用尖底的離心

管進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

蛋白質(zhì)羰基含量測(cè)試盒的實(shí)驗(yàn)注意點(diǎn)


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