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5’-核酸酶(5-NT)檢測試劑盒(藍微板法)的操作步驟

發(fā)布時間: 2023-12-18  點擊次數(shù): 272次

5’-核酸酶(5-NT)檢測試劑盒(藍微板法)的操作步驟

產(chǎn)品簡介:

5-核昔酸酶(5'-NT 或 NTP)廣泛分布于肝臟、膽道及其他各種組織中,該酶活性變化

常與 ALP 活性相平行。但在骨骼系統(tǒng)的疾病中,如腫瘤骨轉(zhuǎn)移、畸形性骨炎、甲亢、佝僂

病等,ALP 活力增高,但是 5-NT 活力正常,所以對于 ALP 活力提高的情況,測定 5-NT

活力有助于判斷 ALP 活力增高原因是肝膽系統(tǒng)疾病還是骨骼系統(tǒng)疾病。

Leagene 5-核首酸酶(5-NT)檢測試劑盒(藍微板法)的檢測原理為 5-核首酸酶能催

 5-磷酸腺昔(AMP)水解,生成腺昔和磷酸,后者與酸反應(yīng)生成藍,可用比色法測

定無機磷的含量,計算 5-NT 活性,利用離子能選擇性的抑制 5-NT 的特性,在測定管

不加人抑制劑鎳離子,測出的活性為 ALP 和 5-NT 總活性,在對照管加入離子,可以測

 ALP 的活性,測定管的酶活性減去對照管的酶活性即獲得 5-NT 活性,通過酶標儀檢測

680nm 處吸光度。5-核昔酸酶的檢測對于研究自由基代謝平衡,抗衰老和腫瘤發(fā)病機制具

有一定的價值。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途

自備材料:

1、蒸餾水、生理鹽水

2、離心管或 EP 

3、離心機、水浴鍋

4、96 孔板、酶標儀

操作步驟(僅供參考) :

1、準備樣品

① 血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備,可以直接用于該試劑盒的測定,尿液通常也可以直接用于測定,-20°C凍存,用于 5-NT 的檢測

② 細胞或組織樣品:取恰當(dāng)細胞或組織進行裂解,可以采用 RAPI裂解液,如果有必要

需進行適當(dāng)勻漿,低速離心取上清,-20°C凍存,用于 5-NT 的檢測。

③ 高活性樣品:如果樣品中含有較高活性的 5-NT,可以使用 AMP 酸性緩沖液稀釋

④ (選做)樣品準備完畢后可以用 BCA 蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,以便于后續(xù)計算單位蛋白重量組織或細胞內(nèi)的 5'-NT 含量

2、配制對照 NT Assay 工作液 :取適量的 NT Assay Buffer III、III,I : II:III=13 :1:2的比例混合,即為對照 NT Assay 工作液,4保存?zhèn)溆谩?/span>

3、配制測定 NT Assay 工作液 :取適量的 NT Assay Buffer I、II,按I:II=15 :1的比例混合,即為測定 NT Assay 工作液,4保存?zhèn)溆谩?/span>

4、配制磷標準工作液:取適量的磷標準(6mmol/L),按磷標準6mmol/L): AMP 酸性緩沖液=1:99 的比例混合,即為磷標準工作液(0.06mmol/L),4保存1個月

5、配制定磷工作液:按定磷酸性液:定磷還原液:溶液=6:1:1 ,即為定磷工作液工作液,4保存。

6、NT 測定:混勻,靜置 5min,蒸水調(diào)零,酶標儀測定 680nm 處吸光度(分別記為 A

白、A標準、A對照、 測定)

注意事項

1、 本試劑盒亦可用分光光度計進行檢測,但檢測的樣品數(shù)相應(yīng)減少,如果有條件盡量采

用分光光度計檢測,使其結(jié)果更為準確

2、待測樣品中不能含有 5-NT 抑制劑,同時需避免反復(fù)凍融

3、用血漿測定有可能引起渾濁。

4、溶血有輕度影響,脂血癥不會引起酶活性改變,但可能影響吸光度。

5、與金屬鰲合的抗凝劑會干擾金屬離子的激活作用,因此不宜采用金屬鰲合抗凝劑

6、離心管或試管必須清潔,否則污染顯色反應(yīng)

有效期:6個月有效;4運輸,4保存

 5’-核酸酶(5-NT)檢測試劑盒(藍微板法)的操作步驟


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