大鼠甘油三酯（TG）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠甘油三酯（TG）水平。用純化的大鼠甘油

三酯（TG）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入甘油三酯（TG） ，

再與 HRP 標(biāo)記的甘油三酯（TG）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗

滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終

的黃色。顏色的深淺和樣品中的甘油三酯（TG）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長(zhǎng)下測(cè)定

吸光度（OD 值） ，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠甘油三酯（TG）濃度。

大鼠甘油三酯（TG）酶聯(lián)免疫分析（ELISA）試劑盒組成

試劑盒組成 48孔配置 96孔配置 保存

說(shuō)明書 1 份 1份

封板膜 2片（48） 2片（96）

密封袋 1 個(gè) 1個(gè)

酶標(biāo)包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品：2.7 mmol/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存

酶標(biāo)試劑 3 ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

樣品稀釋液 3 ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

顯色劑 A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

顯色劑 B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

終止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存

濃縮洗滌液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30 倍）×1瓶 2-8℃保存

樣本處理及要求

1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上

清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心

20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次

離心。

3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清，保存過程

中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心 20分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用 PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞

濃度達(dá)到 100萬(wàn)/ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心 20 分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持 2-8℃的溫度。加入一定量的 PBS（PH7.4） ，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分） 。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上

進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含 NaN3的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

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