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信帆生物供應(yīng):DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I

發(fā)布時間: 2017-12-19  點(diǎn)擊次數(shù): 951次

信帆生物供應(yīng):DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I

 

DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶I

產(chǎn)品描述:

本制品是將TopA基因(E.coli)在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)后,經(jīng)多次純化分離而得到的。完整的DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶IDNA Topoisomerase I)全酶是一分子量97kDa的蛋白。

DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶I催化4種反應(yīng):

1. 催化負(fù)超螺旋DNA的松弛。

2. 在單鏈環(huán)狀DNA分子內(nèi)形成繩結(jié)(Knotting)和解開繩結(jié)(Unknotting)。

3. 催化具有互補(bǔ)堿基序列的環(huán)狀單鏈DNA形成雙鏈閉環(huán)狀DNA分子。

4. 2個環(huán)狀雙鏈DNA分子之中的一個存在DNA鏈的切口時,發(fā)生兩個分子的連結(jié)反應(yīng)(Catenation)或者逆反應(yīng)(Decatenation)。

信帆生物供應(yīng):DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I

產(chǎn)品用途:

1. 催化負(fù)超螺旋松弛

2. 識別錯配

3. DNA的結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換和解析

4. 其他科研用途

保存溫度:

-20℃

產(chǎn)品包裝:

產(chǎn)品組成

體積

DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I(5U/ul)

10ul

10xDNA TopoI Reaction Buffer

1ml

質(zhì)量保證:

經(jīng)多次柱純化,SDS-PAGE膠檢測僅可見清晰單一的目的條帶;PCR方法檢測無大腸桿菌DNA殘留,無核酸內(nèi)、外切酶污染。

活性定義:

一個單位定義為在25μl反應(yīng)體系,37℃15分鐘條件下,能催化>95% 的0.5 μg pUC19 RF I型 (負(fù)超螺旋)DNA的解旋所需要的酶量。DNA超螺旋化通過不含EB的瓊脂糖凝膠電泳來檢測。

反應(yīng)條件:

1x反應(yīng)緩沖液[50mM KAc,20mM Tris-Ac,10mM Mg(Ac)2,100ug/ml BSA(pH7.9儲存于25℃)],37℃溫育。

熱失活:

65℃,20分鐘。

注意事項:

pUC19 RF I型DNA用DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I處理后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳時,如果膠中含有EB染料,反應(yīng)前后DNA條帶位置不發(fā)生改變。這是由經(jīng)過DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶I的作用轉(zhuǎn)換為松弛型的DNA受EB影響,再次變?yōu)槌菪隣顟B(tài)造成的。因此使用DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶I作用后,先用不含EB染料的膠行電泳,再用EB染色。

信帆生物供應(yīng):DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I

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