信帆生物供應(yīng)：DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I

DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶I

產(chǎn)品描述：

本制品是將TopA基因(E.coli)在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)后，經(jīng)多次純化分離而得到的。完整的DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶I（DNA Topoisomerase I）全酶是一分子量97kDa的蛋白。

DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶I催化4種反應(yīng)：

1. 催化負(fù)超螺旋DNA的松弛。

2. 在單鏈環(huán)狀DNA分子內(nèi)形成繩結(jié)（Knotting）和解開繩結(jié)（Unknotting）。

3. 催化具有互補(bǔ)堿基序列的環(huán)狀單鏈DNA形成雙鏈閉環(huán)狀DNA分子。

4. 2個環(huán)狀雙鏈DNA分子之中的一個存在DNA鏈的切口時，發(fā)生兩個分子的連結(jié)反應(yīng)（Catenation）或者逆反應(yīng)（Decatenation）。

信帆生物供應(yīng)：DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I

產(chǎn)品用途：

1. 催化負(fù)超螺旋松弛

2. 識別錯配

3. DNA的結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換和解析

4. 其他科研用途

保存溫度：

-20℃

產(chǎn)品包裝：

質(zhì)量保證：

經(jīng)多次柱純化，SDS-PAGE膠檢測僅可見清晰單一的目的條帶；PCR方法檢測無大腸桿菌DNA殘留，無核酸內(nèi)、外切酶污染。

活性定義：

一個單位定義為在25μl反應(yīng)體系，37℃15分鐘條件下，能催化>95% 的0.5 μg pUC19 RF I型 (負(fù)超螺旋)DNA的解旋所需要的酶量。DNA超螺旋化通過不含EB的瓊脂糖凝膠電泳來檢測。

反應(yīng)條件：

1x反應(yīng)緩沖液[50mM KAc,20mM Tris-Ac,10mM Mg(Ac)2,100ug/ml BSA(pH7.9儲存于25℃)]，37℃溫育。

熱失活：

65℃，20分鐘。

注意事項：

pUC19 RF I型DNA用DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I處理后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳時，如果膠中含有EB染料，反應(yīng)前后DNA條帶位置不發(fā)生改變。這是由經(jīng)過DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶I的作用轉(zhuǎn)換為松弛型的DNA受EB影響，再次變?yōu)槌菪隣顟B(tài)造成的。因此使用DNA 拓?fù)洚悩?gòu)酶I作用后，先用不含EB染料的膠行電泳，再用EB染色。

信帆生物供應(yīng)：DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I