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Labelfree非標(biāo)記定量

Labelfree非標(biāo)記定量

簡(jiǎn)要描述:Labelfree非標(biāo)記定量:蛋白質(zhì)非標(biāo)記定量技術(shù)(Label-Free)是通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析,無(wú)需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn),只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時(shí)所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號(hào)強(qiáng)度,從而對(duì)肽段對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對(duì)定量。

產(chǎn)品型號(hào):

所屬分類:實(shí)驗(yàn)代測(cè)

更新時(shí)間:2025-01-10

廠商性質(zhì):其他

詳情介紹

Labelfree非標(biāo)記定量

服務(wù)介紹:

  蛋白質(zhì)組學(xué)(Proteomics)指的是大規(guī)模、高通量地研究一個(gè)細(xì)胞、組織或物種中表達(dá)的全套蛋白質(zhì)的學(xué)科。近十年來(lái),質(zhì)譜技術(shù)的飛速發(fā)展大大推動(dòng)了的蛋白質(zhì)組學(xué)的進(jìn)步,基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組學(xué)已經(jīng)成為蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域的技術(shù)手段。通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可以對(duì)生物樣本中的蛋白質(zhì)、翻譯后修飾位點(diǎn)(如磷酸化)進(jìn)行大規(guī)模地鑒定或定量,進(jìn)而從高通量的數(shù)據(jù)分析中挖掘有價(jià)值的信息和規(guī)律,為功能機(jī)制的探究提供線索和基礎(chǔ)。2003年,人類基因組計(jì)劃(HGP)完成精細(xì)圖的繪制后,同年,人類蛋白質(zhì)組學(xué)計(jì)劃(HPP)隨即開展起來(lái),反映了科研領(lǐng)域?qū)Φ鞍踪|(zhì)組學(xué)的重視。經(jīng)過(guò)十年時(shí)間,多家單位的共同努力下,人類蛋白質(zhì)組草圖也于2014年在Nature雜志公布了。

  蛋白質(zhì)非標(biāo)記定量技術(shù)(Label-Free)是通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析,無(wú)需使用昂貴的穩(wěn)定同位素標(biāo)簽做內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn),只需分析大規(guī)模鑒定蛋白質(zhì)時(shí)所產(chǎn)生的質(zhì)譜數(shù)據(jù),比較不同樣品中相應(yīng)肽段的信號(hào)強(qiáng)度,從而對(duì)肽段對(duì)應(yīng)的蛋白質(zhì)進(jìn)行相對(duì)定量。其原理是通過(guò)比較質(zhì)譜分析次數(shù)或質(zhì)譜峰強(qiáng)度來(lái)分析不同來(lái)源樣品蛋白的數(shù)量變化,其認(rèn)為肽段在質(zhì)譜中被捕獲檢測(cè)的頻率與其在混合物中的豐度成正相關(guān),因此蛋白質(zhì)被質(zhì)譜檢測(cè)的計(jì)數(shù)反映了蛋白質(zhì)的豐度,通過(guò)適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)公式可以將質(zhì)譜檢測(cè)計(jì)數(shù)與蛋白質(zhì)的量聯(lián)系起來(lái),從而對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定量。

  Label-Free定量技術(shù)常用于研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組各類樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異,發(fā)現(xiàn)生物標(biāo)記物等。

  實(shí)驗(yàn)流程:

  蛋白提取—蛋白酶解—肽段富集—高分辨質(zhì)譜檢測(cè)采集數(shù)據(jù)—數(shù)據(jù)庫(kù)檢索—數(shù)據(jù)分析




  送樣運(yùn)輸要求:

  1、蛋白樣本

  ①蛋白量大于100ug,-80℃保存,純干冰運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融。

  ②建議測(cè)定蛋白濃度后,液氮速凍,避免蛋白降解,另外需要告知蛋白溶液的緩沖液成分和濃度,方便實(shí)驗(yàn)室收到后進(jìn)行后續(xù)處理。

  ③膠條、膠點(diǎn)樣本不建議進(jìn)行定量蛋白質(zhì)組學(xué)。

  2、細(xì)胞樣本

  ①細(xì)胞量1x107個(gè),收集細(xì)胞沉淀,-80℃保存,純干冰運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融。

  ②收集時(shí),用預(yù)冷PBS緩沖液清洗三次,去除培養(yǎng)基成分,然后離心去除上清保存。

  3、血清樣本

  ①樣本量500uL,-80℃保存,純干冰運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融。

  ②樣本應(yīng)盡量避免溶血。

  4、血漿樣本

  ①樣本量500uL,-80℃保存,純干冰運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融。

  ②樣本應(yīng)盡量避免溶血。

  5、尿液樣本

  ①樣本量2mL,-80℃保存,純干冰運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融。

  ②樣品應(yīng)盡量避免帶入糞便殘?jiān)?/span>

  6、動(dòng)物組織樣本

  ①樣本量300mg,-80℃保存,純干冰運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融。

  ②收集時(shí),用預(yù)冷PBS緩沖液沖洗表面血液,并用濾紙吸干多余水分,避免凍存時(shí)結(jié)冰。

  ③固定液浸泡過(guò)的樣本無(wú)法進(jìn)行檢測(cè)。

  7、植物組織樣本

  ①樣本量500mg,-80℃保存,純干冰運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融。

  ②收集時(shí),用預(yù)冷PBS緩沖液沖洗表面泥沙,并用濾紙吸干多余水分,避免凍存時(shí)結(jié)冰。

  ③固定液浸泡過(guò)的樣本無(wú)法進(jìn)行檢測(cè)。

  8、微生物樣本

  ①樣本量干重200mg,-80℃保存,純干冰運(yùn)輸,避免反復(fù)凍融。

  ②收集時(shí),用預(yù)冷PBS緩沖液清洗三次,去除培養(yǎng)基成分,然后離心去除上清保存。

 

Labelfree非標(biāo)記定量



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